狂犬病簡介:
狂犬病病毒通常是由溫血動物咬傷,或抓傷而經由血液傳染. 假如受傷後不經一段時間的治療,感染此疾病的人很容易會導致死亡. 狂犬病病毒由咬傷部位經中樞神經系統而感染腦部,一旦狂犬病病毒到達腦部,毫無置疑地必會造成死亡.
感染狂犬病病毒的人,最早期通常出現不舒服的症狀.病人若沒說出曾被咬傷,那很可能被誤診為Lyme disease.感染狂犬病病毒的人通常有腦炎或者小兒痲痺的症狀.通常在被咬傷後的10-60天內出現症狀,但依據每個病人情況不同而不同.但最後病人會出現懼怕喝水現象,那是由於喉嚨已發炎的原因.死亡通常是因為心臟停止或呼吸停止.一但發現病人受狂犬病病毒感染,即可馬上做治療.
預防狂犬病病毒最常聽到的是做預防接種,假如常曝露在動物中的高危險群如獸醫或經常旅行在非洲,泰國,印度等的人,應該要做預防接種的工作.預防接種是在一個月中接種3次在手臂上.假如已接種過的人,受到狂犬病病毒的感染,也需要2次的post-exposure treatment.只要被懷疑有狂犬病病毒感染的動物咬傷,應馬上看醫生.沒有事先預防接種而被狂犬病病毒感染的人應接受5次在臂上的注射和一次人類抗狂犬病病毒血清.
狂犬病病毒疫苗--- RabAvert:
RabAvert是由Chiron公司出品.它是用來抗狂犬病病毒,保護人類的疫苗. RabAvert是狂犬病病毒培養在純化雞胚細胞中,經一序列培養後,去活化的疫苗.RabAvert第一個在美國經認證13年新的狂犬病病毒疫苗.從1985年以來,RabAvert已風行30個國家,超過1千9百萬個劑量被使用.RabAvert在1997年時被美國FDA認證.RabAvert在德國的Chiron公司被製造,然後由在美國的Chiron分部被銷售.RabAvert被認證是一個安全而有效抗狂犬病病毒的疫苗.在臨床實驗發現並沒有因注射而產生的第三型過敏(type III hypersensitivity).RabAvert最常見的副作用包括輕度到中度的局部因注射引起的疼痛,發炎;還有全身性的過敏反應都曾被報導過.
RabAvert可用在pre-exposure和post-exposure的治療上.在pre-exposure方面通常用於常曝曬在高危險地區的人,做預防接種之用.肌肉注射3次各1ml在第0,7,21或28天時. 在post-exposure方面,用在已被懷疑狂犬病病毒感染的動物咬傷的人身上.先在咬傷的第0天,肌肉注射1ml抗狂犬病病毒血清.然後才在第3,7,14,28天時注射RabAvert疫苗.
狂犬病病毒疫苗的製備:
根據美國專利號碼(US4115195)由Barth,Rudolph等人在西元1978年七月十九日申請的狂犬病疫苗的製備方法.在摘要中說明狂犬病疫苗是利用狂犬病病毒在雞胚細胞培養(chick-embryo fibroplast cell culture)經序列稀釋由10-10 的passages和由10-10 的增值(multiplication)
後再經beta-propiolactone去活化而來.
傳統的去活化狂犬病疫苗是利用狂犬病病毒感染動物如羊,兔的中樞神經系統後,再取其懸浮液當疫苗.但這類疫苗的缺點是含太多外來的蛋白質易引起過敏反應和神經方面的併發症.
第二種改善的方法是利用細胞培養狂犬病病毒.這些細胞有豬或鼠或狗或牛的腎臟細胞.但缺點是病毒量不是非常高,而且使用動物細胞培養可能被其他病毒汙染,還有細胞培養用的血清也須經純化or離心等過程等去除,這些更要花一些成本.
而這個專利發明是著重於在把狂犬病病毒培養在雞胚細胞(chick-embryo fibroplast cell culture)中,並且最好是在溫度30℃-38℃之間.
為什麼要使用雞胚細胞呢(chick-embryo fibroplast cell culture)? 因為呢很便宜易於接受,而且培養這種雞胚細胞呢(chick-embryo fibroplast cell culture)不易被其他病毒污染.
首先把狂犬病病毒(各種strain皆可)10 LD(50)/ml的量顱內注射在重約11-15gm的白鼠中.然後把感染動物的腦部懸浮液稀釋為10 後放入雞胚細胞(chick-embryo fibroplast cell culture).經37℃培養5天後,少於25%的細胞會被感染(為passageI1).然後把passageI1的病毒液稀釋為10 , 經37℃培養6天後約25%的細胞會被感染(為passageI2).這時把passageI2的病毒液各分成為10 和10 (為passageI3).在10 部分, 經37℃培養4天後,約70%的細胞會被感染; 在10 部分, 約90%的細胞會被感染.以此類推一直稀釋(passageI4,I5….)感染製造病毒出來.
製備病毒後,就準備要去活化病毒…………
例如把10 的病毒稀釋液培養在32℃的雞胚細胞(chick-embryo fibroplast cell culture)利用連續流動離心法(continuous flow centrifuge)得到病毒上清液約10 LD(50)/ml.然後用beta-propiolactone去活化(inactivate)病毒.然後使用NIH-test(a mouse protection test),去檢查製造出來的去活化狂犬病疫苗的品質.
狂犬病病毒疫苗發展現況
就如同我們所知目前所有經美國食品藥物管理局(FDA)認証的上市的狂犬病病毒主要以去活化病毒(inactivated virus vaccine)為主,例如Chiron的RabAvert. 在學術上,其實有許多學者致力於發展
不同於傳統疫苗的研究,例如次單位疫苗(subunit vaccine). 次單位疫苗(subunit vaccine)是利用重組基因的技術(Recombinant DNA Technology)把主要能引起中和性抗體的病毒基因片段選殖到表現載體中去表現我們要的基因.
在這些研究中,利用了很多不同的表現系統去表現我們要的基因,其中引起的保護機制不盡相同.有兩篇我覺得很有趣的文章,提出來跟大家分享.
第一篇是發表於1991年,三月,Proc Natl Sci USA;88(5):2001-5. 其題目是Rabies virus nucleoprotein expressed in and purified from insect cells is efficacious as a vaccine.作者是 Fu ZF等.首先他們把狂犬病病毒的N核蛋白基因(nucleoprotein N)選殖於桿狀病毒表現載體(baculovirus expressing vector)中.利用昆蟲細胞去產生我們要的蛋白質,經過一些純化過程去純化蛋白質,例如親和性管柱(affinity chromatography). 經由單株抗體確認昆蟲細胞表現的確實是我們要的蛋白質.這些經純化的重組病毒蛋白質跟原來的病毒蛋白質特性一樣皆能引起具有病毒特異性的幫助型的T淋巴球(virus-specific helper T cells). 在動物實驗中,他們把純化的重組病毒蛋白質打入老鼠體內,然後再打去活化病毒疫苗.跟只打去活
化病毒疫苗的老鼠的比較,發現打純化的重組病毒蛋白質的老鼠體內有高出對照組20倍的抗N核蛋白基因(nucleoprotein N)抗體.再用致死的狂犬病病毒去challenge這些老鼠,發現抗N核蛋白基因(nucleoprotein N)抗體具有保護力能使老鼠免於死亡. 這種利用桿狀病毒表現載體(baculovirus expressing vector).利用昆蟲細胞去產生我們要的蛋白質,可經生物程序技術(Bioprocess Engineering)大量生產純化我們要的蛋白質,提供了不同於傳統狂犬病病毒疫苗的方法.
第二篇是發表於1998年,一月,Vaccine;16(2-3):115-8.
其題目是Gene qun particle-mediated vaccination with plasmid DNA confer protective immunity against rabies virus infection. 作者是Lodmell DL等.他們把狂犬病病毒某個strain,2個micrograms醣蛋白基因黏在2.6-micron gold beads上,利用gene gun技術去打入老鼠體內,經多次booster後,發現老鼠體內產生能中和狂犬病病毒的抗體.而且這些抗體效價維持超過300天.這些經免疫過的老鼠老鼠再經致死狂犬病病毒感染,發現皆能存活下來.Lodmell DL他們展示了一種新的方法
—gen gun-based delivery of DNA 又增加了不同於傳統狂犬病病毒疫苗的方法.台灣地區衛生機關現有儲備之
特殊防疫用藥品
狂犬病免疫球蛋白 Rabies Immune Globulin (RIG)
適應症:狂犬病 儲存地點:行政院衛生署防疫處檢疫總所疫情組花蓮檢疫分所中區疫病監視中心南區疫病監視中心 注意事項: 1.當咬人動物為狂犬病動物或患者有疑似狂犬病之情況下可申請，但一般動物咬傷請勿請領本劑。 2.劑量及用法：患者被咬傷後，須於 48 小時內以 20I.U. 每公斤體重之劑量施予肌肉注射。 3.本品以治療為先，故無需考慮其他禁忌。 狂犬病疫苗 Inactivated Rabies Vaccine (HDCV) 適應症:狂犬病 儲存地點:行政院衛生署防疫處檢疫總所疫情組花蓮檢疫分所中區疫病監視中心南區疫病監視中心 注意事項:1.當咬人動物為狂犬病動物或患者有疑似狂犬病之情況下可申請，但一般動物咬傷請勿請領本劑。 2.劑量及用法：病患經免疫球蛋白處理提供被動免疫能力後，仍應注射本劑引發自動免疫能力。本品共應注射 5 劑 (每劑 1ml)第一劑注射後之第 3, 7, 14, 30 天分別再注射 4 劑；如有必要可於 90 天後再追加一劑，一般以肌肉注射為之，皮下注射亦可。 3.患者施打本劑，皆因狂犬病嚴重威脅，故較無需考慮其他禁忌。但當病患正在接受腎上腺皮質固醇類或免疫抑制藥劑治療時，可能導致疫苗失效。
Chiron 公司的簡介:
Chiron公司是一家全世界性的生物技術公司,其總部在美國,加州,Emeryville(靠近San Francisco. 其主要市場在發展生物製藥,血液檢驗,疫苗.
Chiron致力於研究和發展,期盼能發展對人類健康有益的產品. Chiron把研究方向大致分為感染性疾病,癌症,和心臟血管疾病.
Chiron的成功是基於基礎研究和發展新的產品.其主要細分的工作為重組DNA的技術, 基因治療, 疫苗, 小分子的發現,和遺傳學.