利用SDS-PAGE測定蛋白質的分子量是一種常被使用的實驗,可以用來
觀察蛋白質的表現量和分子量,亦可用來鑑定蛋白質的純度
結果:
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討論:
- SDS-PAGE分成上下兩層gel , stacking gel and separating gel前者能將sample集中成一直線,使所有的sample在同一起跑線開始跑,能使實驗更準確.能夠stacking是因為在stacking gel的PH值是6.8,此時glycine是帶正電,和Tris所帶的電性不同,所以可以擠壓sample,在到達separating gel(PH=8.8)時,glycine不再是帶正電,而與Tris的電性相同,因此不再stacking,而可以開始分離sample.
- 在退染的時候,我們發現使用退染劑的效果反而沒有使用熱水來的快, 雖然不知道詳細的機制為何, 可能是退染劑得品質不是那麼好吧?可是如果使用熱水的反應較好的話,建議以後都可以用熱水退染,成本比較低,又不含有會污染環境的藥品
- 在中間那條band可以看出有蛋白質的表現.Lane 1 所loading的是PM2 marker, lane 2是E.coli transformed PET30a(+)以IPTG induce, lane 3是(NB)E.coli