格蘭氏染色法由丹麥醫生Gram於1884年所發明，至今仍為鑑別細菌之最重要方法。依據格蘭氏染色法我們可將細菌分為兩類：格蘭氏陽性（Gram-positive；Gram+）和格蘭氏陰性（Gram-negative；Gram-）。其染色原理與此二類細菌之細胞壁結構有重大關係。
格蘭氏陽性
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格蘭氏陰性
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碘會和結晶紫形成crystal violet-iodine complex，由於G+菌的細胞壁比G-含有較多的太聚醣和較低的脂質含量，因此，酒精無法使複合體離開，也就無法使G+脫色。
一. Gram-細菌之細胞壁含脂量高，以酒精處理時會將部份脂質萃取出來，而使細胞壁結構鬆動，通透性增加，故結晶紫複合體被帶出細菌體外，使菌體呈現無色；而Gram+細菌之細胞壁幾乎不含脂質，酒精甚至會使細胞壁脫水，故結構更形緻密，結晶紫複合體就被留在細菌體內，呈現紫色。
二.酒精處理時，會使peptidoglycan空隙縮小，Gram+細菌壁厚，而Gram-者較薄，所以結晶紫複合體離開Gram-細菌的機會較大。
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Step
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procedure
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results
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Gram+
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Gram-
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初染
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結晶紫/30s
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紫色
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紫色
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媒染
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碘液/30s
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紫色
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紫色
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脫色
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酒精/20s
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紫色
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無色
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反染
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蘇木紅/30s
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紫色
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紅色
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[實驗原理] [實驗方法]